Методы лабораторной диагностики кандидозов

Кандидоз — причины, симптомы диагностика и лечение

Кандидоз — инфекционное заболевание с поражением кожи, слизистых оболочек и/или внутренних органов, вызываемое дрожжеподобными грибками рода Candida.

Термин «кандидоз» подразумевает патологический процесс, основу которого составляет избыточный рост Candida первично в желудочно-кишечном тракте и вторично — в других областях (на слизистой оболочке гениталий, бронхов, в паренхиматозных органах).

Причины

Кандидоз (молочница) поражает не только наружные, но и внутренние органы. Причиной заболевания являются дрожжеподобные грибы, которые обитают в организме каждого человека.

1. Спровоцировать интенсивное размножение грибка может множество факторов. Например, переохлаждение, болезнь, стресс, изменение гормонального фона (во время беременности или приеме гормональных препаратов).
2. При приеме антибиотиков наряду с патогенными бактериями погибает и полезная микрофлора кишечника и влагалища, которая контролирует рост и развитие грибов Candida. Наличие хронического заболевания, снижающего активность иммунитета (ВИЧ, венерические заболевания, инфекции) очень часто вызывает кандидоз.
3. Кандидозом могут сопровождаться эндокринные заболевания (диабет, ожирение, нарушение функций щитовидной железы).
4. Наконец, причинами кандидоза могут стать жаркий климат или ношение неудобного тесного или синтетического белья.

Источником инфицирования кандидозом, как правило, является собственная флора организма (аутоинфекция), однако может произойти заражение извне. Вызывая болезнь, грибок не меняет своих свойств – свои свойства меняет организм (снижается местная защита). Прикрепляясь к клеткам эпителия, патогенный грибок начинает паразитировать в них, проникая вглубь тканей.

В борьбе организма с кандидозом часто возникает динамическое равновесие, когда грибок стремится проникнуть глубже в ткани, но не может, а организм пытается его отторгнуть и также не может. В таком случае процесс может длиться годами, смещение равновесия в ту или иную сторону приведет либо к выздоровлению, либо к обострению процесса.

Кандидозы встречаются в нескольких формах в зависимости некоторых особенностей.

1. Носительство.Человек является носителем заболевания. Симптомы кандидоза отсутствуют, лечить нет нужды.
2. Острая.Сопровождается зудом, высыпаниями, выделениями. Лечить необходимо комплексно и качественно. Чаще всего инфицированию подвержены дети младшего возраста.
3. Хроническая.Характерно затихание и проявление симптомов, возможны рецидивы. Развивается в случае, если неправильно лечить антибиотиками длительное время, применять гормональные контрацептивы.

Эта болезнь имеет несколько разновидностей, поскольку не имеет точной локализации в организме:

• Урогенитальный кандидоз
• Кандидозы ротовой полости
  • Молочница губ
  • Молочница языка
  • Стоматит, а также орофарингеальный кандидоз – молочница слизистой оболочки рта, миндалин, десен.
• Кожные и ногтевые кандидозы
  • На складках кожи (подмышки, область между ягодицами, паховые складки).
  • Кандидоз открытых (или гладких) частей кожи. Встречается редко.
  • Кандидоз на ладонях.
  • Кандидоз на ногтевых пластинах.
  • Кандидоз стоп.
• Кандидозы внутренних органов
  • ЖКТ (желудка, пищевода, кишечника, заднего прохода).
  • Легких и бронхов.
  • Сердца.
  • Мозговой оболочки.
  • Глаз и ушей.
• Кандидозы новорожденных детей (например, псевдомембранозный)

Симптомы кандидоза

Заболевание распространено повсеместно. Возбудители кандидоза обнаружены в воздухе, почве, на овощах, фруктах, продуктах кондитерского производства. Дрожжеподобные грибы встречаются как сапрофиты на здоровой коже и слизистых оболочках.

Проявления кандидоза, а следовательно симптомы и признаки зависят от локализации очага заболевания.

Кандидоз слизистой оболочки рта (оральный кандидоз, детская молочница) чаще всего встречается у детей, как правило, они заражаются от матери через родовые пути. Симптомы:

• слизистая щек, зева, язык и дёсны становятся красными,
• появляется отечность,
• затем на слизистой оболочке полости рта возникают очаги белого творожистого налета.

При кандидозе кожи и ее придатков чаще всего очаги располагаются в крупных складках:

• пахово-бедренных,
• межъягодичных,
• подмышечных впадинах,
• под молочными железами.

Может поражаться кожа в межпальцевых складках,  чаще у детей и взрослых, страдающих тяжелыми заболеваниями – на коже ладоней, стоп, гладкой коже туловища и конечностей. Очаги в крупных складках выглядят как мелкие 1-2 мм пузырьки, которые вскоре вскрываются с образованием эрозий. Эрозии увеличиваются в размерах, сливаются, образуя большие участки повреждения.

Очаги кандидоза имеют неправильную форму, темно-красную окраску, вокруг очага – полоска отслаивающегося эпидермиса. Вне складок очаги имеют вид красных пятен с шелушением в центре, изредка вокруг очага могут появляться мелкие пузырьки.

Кандидоз влагалища (кандидамикоз, молочница) — это инфекционное заболевание слизистой влагалища, которое нередко распространяется на шею матки и вульву. Практически каждая женщина сталкивалась с таким заболеванием, а некоторые признаки кандидоза беспокоят постоянно. Чаще всего встречается у женщин репродуктивного возраста, но может возникать у девочек

Кандидоз кишечника (дисбактериоз) часто сопровождает вагинальный кандидоз или развивается изолированно.

Симптомы характерные для этого вида кандидоза: в стуле больного, страдающего кандидозом кишечника, часто обнаруживаются белые творожистые хлопья.

Кандидоз пищевода – заболевание, которое среди всех имеющихся в области гастроэнтерологии очень трудно определить. Для недуга характерно несоответствие степени тяжести болезни, уровня поражения и состояния самого пациента.

Осложнение

При своевременном лечении кандидоз не наносит особого вреда здоровью. Но симптомы кандидоза могут доставить массу неприятных ощущений.

Длительно существующий, он может приводить к поражению других органов, чаще всего мочеиспускательного канала, мочевого пузыря и почек.

В особо тяжелых случаях прогрессирующее заболевание может поражать репродуктивные органы, что приводит к бесплодию, как у мужчин, так и у женщин. Но наибольшую опасность кандидоз представляет для беременных женщин, т.к. очень высок риск поражения плода.

Как диагностируют заболевание

Визуальные методы диагностики кандидоза. При осмотре выявляются воспаление участков кожи, ограниченное бордюром отслаивающегося, мацерированного эпидермиса, белесоватый налет на слизистых оболочках.

Лабораторная диагностика. Вопреки распространенному мнению, главным методом диагностики кандидоза до сих пор является микроскопия мазка с пораженных участков слизистой. ПЦР (ДНК — диагностика), популярная в последнее время, как правило, плохо подходит для диагностики кандидоза.

Лабораторная диагностика заболевания включает в себя:

• микроскопию мазка выделений
• культуральную диагностику (посев)
• иммуно-ферментный анализ (ИФА)
• полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Лечение кандидоза

Лечение кандидоза направлено на устранение факторов, способствующих возникновению кандидоза. При поражении кожи проводится местное лечение открытым способом с применением противогрибковых мазей.

Лечащий врач от этого недуга назначает системные и местные лекарственные препараты. Местные средства не всасываются в кровь – действуют только на слизистую оболочку, пораженную грибком Candida. Они останавливают размножение и рост грибков, снимают неприятные ощущения и восстанавливают  пораженные ткани.

Профилактика

Поскольку кандидоз представляет собой рецидивирующий инфекционный процесс, который встречается весьма часто, то существуют некоторые методы профилактики, приводящие к снижению частоты возникновения повторов заболевания, а также препятствуют первичному инфицированию.

Из общепринятых средств профилактики кандидоза следует отметить следующие:

1. закаливание организма,
2. употребление витаминов и микроэлементов весной и осенью,
3. регулярные стандартные методы гигиены;
4. особое значение следует отдать типу одежды и нижнего белья. Рекомендуется ношение хлопчатобумажного белья, дышащей и свободной повседневной одежды.

При своевременном лечении прогноз благоприятный, излечение как правило наступает в течение недели. При осложненных формах и поражениях внутренних органов лечение кандидоза затруднено.

Шапилова Н.В.

Источник: https://kvd4.ru/kandidoz-prichiny-simptomy-diagnostika-i-lechenie/

Как проводится диагностика кандидоза?

Диагностика кандидоза осуществляется несколькими лабораторными методами:

• микроскопическое и культуральное исследования (посев);
• иммуноферментный анализ;
• полимеразная цепная реакция.

Каждый из методов обладает своими особенностями и позволяет выявить болезнетворные микроорганизмы, которые провоцируют развитие кандидоза, или молочницы.

Окончательный диагноз устанавливается только после того, как собран биоматериал и сданы все допустимые лабораторные анализы на кандидозы, а также получена расшифровка с положительными результатами по каждому пройденному виду клинического исследования.

Как диагностировать молочницу правильно, и какие методы используются при этом?

Общие положения диагностики кандидоза

Для того чтобы получить достоверный диагноз и определить какие анализы сдают при молочнице, необходимо учитывать следующие положения, которые являются ключевыми при проведении диагностических тестов:

1. Диагностика включает обязательное дифференцирование носителей инфекции от непосредственно страдающих этим заболеванием пациентов. Известно, что около 25% всего населения являются носителями кандидозных грибов в полости рта, кишечнике и детрите. Кандиду относят к условно-патогенным микроорганизмам, поэтому она всегда присутствует даже в нормальной микрофлоре человеческого организма.
2. Важно учитывать количество полученного биологического материала для исследования, поэтому в ряде случаев необходимы повторный забор биожидкостей и биопсия слизистых оболочек.
3. Если клетки кандиды проявляются случайно, то рекомендуется пройти полное обследование. Это связано с тем, что простая молочница может стать предвестником таких серьезных заболеваний, как СПИД, сахарный диабет и рак крови. В некоторых случаях поражаются внутренние органы.
4. Во время проведения лабораторных анализов необходимо стремиться повысить чувствительность кандиды к антимикотическим препаратам. Кроме того, важно правильно идентифицировать виды грибов и их численность.
5. Молочница полностью не исключает наличие возможных сопутствующих заболеваний. Возможно, что наряду с кандидозным поражением имеются туберкулезные, онкологические, аутоиммунные, аллергические и другие патологии.

Важен тот факт, что при диагностике некоторых инфекционных заболеваний необходимо обращать внимание на наличие псевдомицелия у кандиды, так как только вид Candida Albicans способен его образовывать. Но другие формы гриба, которые его не имеют, тоже могут присутствовать в лабораторном образце биологической жидкости.

Если при микроскопии Albicans не выявлена, то необходимо провести дополнительные исследования, которые смогут идентифицировать другие формы гриба, вследствие чего диагностируется молочница. В частности, лучшие результаты дает метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Внешние критерии диагноза

Если имеет место орофарингеальная молочница, то необходимо учитывать наличие местных факторов риска:

• съемные зубные протезы;
• соски-пустышки;
• наличие красного плоского лишая;
• частое применение ингаляций с кортикостероидными препаратами.

Все это может вызывать дискомфорт в слизистой полости рта и жжение. Чаще всего наблюдаются фибринозные и атрофические изменения во рту.

Согласно стандарту диагностики кандидоза, в данном случае проводится цитологическое исследование образца биожидкости из полости рта. Если выявилось наличие псевдомицелия кандиды, то подтверждают предполагаемый диагноз.

При поражении грибом пищевода и желудка в качестве местных факторов риска рассматривают наличие ожогов, полипоза, дивертикулеза. Часто молочница развивается на фоне предшествующего оперативного вмешательства в ткани пищевода. В желудке может быть обнаружен эрозивный гастрит. Для проведения диагностики берется мазок-отпечаток слизистой оболочки желудка.

Кандидоз кишечника проявляется в виде абдоминальной боли; в стуле обнаруживают кровь и слизь. Также одновременно развивается системный кандидоз. Если имеет место кандидоз неинвазивный, то часто его сопровождают другие патологические бактерии (стафилококк, морганелла).

Показания к лабораторному исследованию

Микроскопическое исследование необходимо проводить в тех случаях, когда имеются явные признаки и симптомы развития инфекционного или воспалительного заболевания. Благодаря этому методу имеется возможность как выявить молочницу, так и определить настоящую этиологию патологического процесса. Клетки дрожжевого гриба кандиды легко обнаруживаются в биожидкости.

Посев на культуры рекомендуется проводить, когда молочница принимает рецидивирующий характер и длится достаточно долгий период времени.

Важно проводить анализы на кандидозы, если их микроскопические формы и другие потенциальные возбудители заболевания не были обнаружены. Если проводилась антимикотическая терапия, то культуральный анализ показан в обязательном порядке.

Кандиды питаются остатками тканей отмерших микроорганизмов. Они могут находиться на поверхности тела, коже и слизистых оболочках.

Это говорит о том, что если во время диагностики обнаружены только ДНК кандиды, то этой информации для диагностики недостаточно.

Какие анализы сдавать при молочнице, укажет лечащий врач во время осмотра, исходя из имеющихся жалоб и характерных клинических симптомов.

Микроскопическая диагностика

Лабораторная диагностика кандидоза имеет в своем арсенале несколько методов, с помощью которых можно быстро обнаружить дрожжеподобные грибы. Но лучшими из них признаны микроскопический анализ мазка, взятый с пораженных участков слизистой оболочки, и бактериологический посев. Это своего рода лабораторный «золотой стандарт», с помощью которого легко диагностируется молочница.

Хорошие результаты дает метод ПЦР (полимеразная цепная реакция), но для диагностики кандидоза его возможностей недостаточно. Рассмотрим микроскопические методы анализа более детально:

1. Микроскопия мазка. Благодаря ему проводится сравнительная характеристика бластоспор и псевдомицелия кандиды. Анализ на молочницу проводят с помощью фиксированных и нативных препаратов, которые окрашены по Граму, или в синий метиленовый. Именно обнаружение псевдомицелия говорит о том, что имеет место развитие инфекционного заболевания. Единственный недостаток микроскопии — это возможные визуальные ошибки при идентификации определенных видов бактерий. Диагностическая чувствительность этого метода тоже достаточно низкая и составляет максимально 40%. Для повышения чувствительности псевдомицелий клеток обрабатывают специальными красящими веществами. Благодаря контрастности проявляться под микроскопом они будут легко, отличаясь от других форм кандиды. Этот способ уже повышает чувствительность метода до 80%.
2. Бактериальный посев (культуральная диагностика). Благодаря этому методу исследования врачи имеют возможность не только выявить самого возбудителя инфекционного заболевания, но и определить его количественное соотношение. Успешно определяется и чувствительность кандидозных грибов к антимикотическим лекарственным препаратам. Важную роль в этом анализе играет предварительная подготовка, так как от количества бактерий в биологическом образце будет зависеть результат исследования. Диагностика молочницы занимает до 7 дней. Посев осуществляют в специальные плотные питательные среды. Чувствительность этого диагностического метода очень высока и достигает 95%. Микробиологическая диагностика кандидоза имеет свои недостатки — это высокая стоимость в некоторых клинических случаях и возможные проблемы при транспортировке биоматериала.

Диагностика кандидоза методом ИФА и ПЦР

ИФА, или иммуноферментный анализ, позволяет распознать большой спектр возбудителей различных заболеваний. Он основан на способности человеческого организма вырабатывать антитела в качестве ответной реакции на появление антигенов (чужеродных веществ в сыворотке крови).

Тест состоит из двух частей: иммунной и ферментной реакций. Обе являются взаимозависимыми, так как иммунная реакция выявляет количество патологических клеток, позволяет определить их вид и связать их воедино, а ферментная — помогает визуализировать полученный результат.

Благодаря тому, что организм человека вырабатывает антитела, метод ИФА осуществляется за счет их образования. 5 видов белковых структур участвуют в выявлении инфекции:

Для диагностики определенного заболевания берут только 1 вид антител, который выявляется наиболее чувствительным к антигенам возбудителя.

Суть ферментативной реакции заключается в том, что благодаря особым ферментам имеется возможность превратить весь исследуемый материал (субстрат) в другое вещество (продукт реакции). Причем во время воздействия фермента есть только 1 реакция, а воздействие конкретного фермента возможно только на конкретный субстрат. Таким образом, происходит узнавание или родство материалов.

Преимущество метода ИФА заключается в том, что он позволяет не только выявить наличие возбудителя и диагностировать заболевание, но и определить степень его развития. Например, с помощью данной методики можно определить хроническую или острую стадии патологии.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) напрямую способна обнаруживать возбудителя инфекционного заболевания, причем чувствительность этого анализа составляет 90%. Особенно важно то, что он позволяет дифференцировать грибы кандида с псевдомицелием от тех, что его не имеют. Это принципиально важно для последующей интерпретации результатов и диагностики.

Как интерпретируют полученные результаты?

Если во время проведения одного или нескольких лабораторных исследований были обнаружены бластоспоры и псевдомицелий грибов кандиды, то это является явным диагностическим признаком воспалительного заболевания кандидоза. Диагностика молочницы, таким образом, упрощается.

Если наряду с полученными результатами имеются ярко выраженные симптомы и признаки воспалительного процесса (покраснение тканей, неприятный «рыбный» запах), то это дает возможность поставить этиологический диагноз с определением локализации очага воспаления (уретрит, баланопостит, вульвовагинит и т.д.). В этом случае необходимость продолжать лабораторные исследования полностью отпадает.

Если получен отрицательный результат во время микроскопического исследования, то это еще не значит, что молочница отсутствует. Важно провести дополнительные лабораторные тесты с помощью других диагностических методов. Это позволит выявить возбудителей заболевания, особенно если оно протекает в хронической рецидивирующей форме.

Источник: https://stopmol.ru/molochnitsa/diagnostika-kandidoza/

Лабораторная диагностика кандидоза

… грибы рода Candida размножаются на любом биологическом субстрате.

В связи с тем, что для заболевания кандидозом характерен полиморфизм клинических проявлений лабораторному исследованию подлежит разнообразный патологический материала.

В зависимости от характера и локализации поражения, для лабораторного анализа берут:• мокроту; • соскобы с кожи или слизистых оболочек; • ногтевые чешуйки; • кровь, ликвор, мочу, желчь, фекалии; • пунктаты из закрытых полостей, отделяемое свищей; • биопсированный и секционный материал.

Вначале производят исследование нативного материала (за исключением крови); при этом ликвор, мочу и желчь подвергают (!) предварительному центрифугированию (1500 — 2000 об/мин, 10 — 15 мин). Препараты готовят в 10 — 20% растворе щелочи при слабом нагревании. Обнаружение нитчатой фазы возбудителя (мицелия или псевдомицелия) является важным свидетельством наличия кандидоза.

Количество дрожжевых клеток в каждом поле зрения служит ориентиром при подготовке серийных разведений для количественного посева на плотные питательные среды: единичные клетки в поле зрения при большом увеличении микроскопа (х400) свидетельствуют об их содержании порядка десятков тысяч в 1 мл исследуемого материала.

Разведения патологического материала, содержащего нормальную микрофлору (мокрота, фекалии, моча, желчь и т.д.), готовят в жидкой питательной среде (обычно жидкое сусло или жидкая среда Сабуро) и затем высевают определенное количество материала (0,1 — 0,2 мл) на аналогичные плотные среды.

Для подавления роста контаминирующих бактерий в среды добавляют антибактериальные антибиотики (чаще всего применяют пенициллин и стрептомицин: по 50 — 100 ед/мл среды или 0,05% хлорамфеникола).

Если вместо соскобов использованы смывы, то тампоны предварительно встряхивают в течение нескольких минут в 5 — 7 мл жидкой питательной среды, а затем производят посев на плотные среды определенного объема соответствующего разведения исходной взвеси. Соскобы с кожи и ногтевых пластинок помещают на скошенные питательные среды.

Посев крови и ликвора производят в 10-кратный объем жидкой среды Сабуро или МПБ с 2% глюкозы без добавления антибиотиков, так как кандидозная фунгемия иногда сочетается с бактериальным сепсисом. Наиболее высокую эффективность выделения грибов из крови удалось обеспечить при использовании комбинированной сердечно-мозговой среды.

Посев крови делают 3-4-кратно, осуществляя забор из разных вен с интервалом в несколько дней при (1) отсутствии парентерального питания или (2) капельного введения лекарственных веществ. При наличии у больного фунгемии рост грибов появляется через 24-48 ч, максимальная инкубация осуществляется до 30 суток при периодических пересевах на плотную питательную среду.

Биопсированный и секционный материал используют для приготовления гистологических препаратов (окраска PAS-методом), а остатки материала высевают (методом отпечатков или после предварительного измельчения) на плотные и в жидкие питательные среды. Инкубацию предпочтительнее проводить при 25 — 30оС, хотя патогенные для человека виды грибов хорошо растут и при 37оС.

При исследовании мочи наряду с культуральным методом рекомендуется дополнительное исследование, имеющее целью (!) выявление иммуноглобулинов человека на поверхности бластоспор.

Для этого около 5 мл второй порции мочи центрифугируют в течение 5-10 мин при 1500 об/мин и из осадка готовят (1) нативные препараты и мазки, окрашенные по Граму, а также (2) препараты для иммунолюминесцентного исследования при котором фиксацию осуществляют метанолом, а после высушивания мазка наносят антисыворотку против глобулинов человека, меченную изотиоцианатом флюоресцеина.

В осадке мочи больных мочекаменной болезнью нередко (около 7% проб) присутствуют клетки золотистого стафилококка (В.Г. Кубась и соавт.), которые за счет наличия у них белка А неспецифически связывают Fc-фрагменты IgG, что может привести к получению ложноположительных результатов реакции иммунолюминесценции. При выявлении грамположительных кокков для блокировки белка А рекомендовано (В.

Г. Кубась и соавт.) к осадку мочи добавлять равный объем кроличьего глобулина с концентрацией белка 1,0 мг/мл. После (1) инкубации смеси при 37оС в течение 30 мин и (2) 3-кратного промывания осадка фосфатным буферным раствором (3) готовят мазки и (4) фиксируют их метанолом.

Предварительная обработка кроличьим глобулином взвесей золотистых стафилококков (100-500 млн/мл) подавляла их неспецифическую флюоресценцию.

Выявление светящихся дрожжевых клеток при параллельном обнаружении дрожжей в нативном и окрашенном по Граму препаратах свидетельствует о том, что они несут на своей поверхности специфические глобулины, то есть о наличии у пациента тканевых поражений. Положительный антиглобулиновый тест свидетельствует о кандидозном поражении мочевыводящих путей.

Контролем для исключения аутофлюоресценции дрожжевых клеток является исследование неокрашенного препарата.

(!) Видовое определение выделенных культур является важным критерием диагностики и имеет комплексный характер, включающий (1) изучение внешнего вида колонии, (2) ферментативной активности и (3) ассимиляционной способности штамма, (4) типа филаментации, а также (5) характера роста в жидкой питательной среде (наличие поверхностной пленки, поднимающееся по стенке пробирки над поверхностью среды кольцо и т.д.). Большинство патогенных для человека видов грибов рода Candida может быть идентифицировано без постановки ассимиляционного теста. Из-за резкого преобладания C. albicans у больных и миконосителей, у выросшей культуры прежде всего выявляют наличие характерного морфологического признака этого вида — хламидоспоры. С этой целью производят прерывистый штриховой посев на рисовый агар, часть посева покрывают фламбированным покровным стеклом. Посевы инкубируют при 37оС или при 22оС. Подавляющее большинство штаммов C. albicans образуют хламидоспоры через 12-24 ч, реже — через 48 ч. Выявление хламидоспор позволяет идентифицировать культуру как C. albicans и не проводить дальнейших исследований. Культуры, у которых хламидоспоры выявить не удалось, исследуют по комплексу признаков. Ферментативную активность определяют на обычных средах «пестрого ряда» или в дрожжевом аутолизате, в которых конценирация углеводов должна составлять 2%. Инкубацию проводят при 25-28оС. Некоторые штаммы могут вызывать ферментацию в поздние сроки (10-20 дней), поэтому для ускорения процесса рекомендуют использовать агаризованные Среды (0,1-0,15% агар-агара); при этом срок наблюдения сокращается до 2 дней. При постановке ассимиляционного теста в стерильную чашку Петри вносят 1-2 мл взвеси культуры, которую заливают 18-20 мл базовой среды с добавлением дрожжевого аутолизата, охлажденной до 43-45°. После застывания агара его подсушивают и на поверхность наносят стерильные диски фильтровальной бумаги, пропитанной 20% или насыщенным раствором изучаемого источника питания. Можно также на поверхность агара наносить небольшие количества нерастворенного источника питания. Чашки инкубируют в перевернутом виде при 25-28оС; в положительных случаях в течение 2-4 дней вокруг источника питания обнаруживается рост культуры гриба. Для выявления типов роста посев осуществляется на картофельный агар с 1% глюкозы методом «врезания»: микологическую лопатку с биомассой культуры погружают на 1/3 толщины агара, причем посев делают в виде двух сходящихся, но не пересекающихся лучей. Чашки инкубируют в течение суток при 37оС, а затем при 25оС. Нитчатая форма образуется в толще агара по периферии посева в течение 3-7 дней. При задержке филаментации культуру засевают на среду Городковой, посевы инкубируют при 22оС в течение 10-15 дней, периодически исследуя для выявления аскоспор. Также наряду с микроскопическим исследованием нативных препаратов, мазки окрашивают по Цилю-Нильсену; при этом кислотоустойчивые споры воспринимают рубиново-красную окраску. Эффективное окрашивание спор истинных дрожжей достигается при использовании 2% водного раствора фуксина. В последнее десятилетие разработан ряд автоматизированных систем для видовой идентификации грибов рода Candida, в основу которых положено определение ассимиляционной способности изучаемых культур. Каждая лунка содержит определенный источник питания, посевы инкубируются при 30оС в течение 24 ч. Помутнение среды свидетельствует об ассимиляции данного источника питания, регистрация результатов производится фотометрически. При помощи компьютера по нумерационно-кодовому принципу осуществляют видовое определение штамма.

Серологическая диагностика. Высокую диагностическую значимость имеет реакция непрямой иммунолюминесценции. У большинства здоровых лиц ее интенсивность составляет 1:10 — 1:20, диагностическим считается титр 1 и более. Для реакции агглютинации частиц латекса, сенсибилизированных соматическими антигенами, диагностическим считают титр 1:8; у больных с выраженной иммуносупрессией диагностическое значение имеет 4-кратное увеличение титра в процессе заболевания. Для поиска антигенов гриба используют частицы латекса, сенсибилизированные антителами, но во избежание ложноположительных результатов, в сыворотке должен отсутствовать ревматоидный фактор.

При использовании встречного иммуноэлектрофореза выявление 2 и более дуг преципитации имеет диагностическую ценность. У здоровых лиц, а также у больных поверхностным кандидозом дуги преципитации, как правило, отсутствуют. При перекрестном иммуноэлектрофорезе у больных висцеральным кандидозом выявляется в среднем 10 дуг преципитации (пределы колебаний — 5-20), при кандидозном эндокардите — около 8 (1-11), а в контрольной группе — 2 (0-5). Специфичность метода увеличивается при использовании промежуточного геля с конкавалином А, который связывает маннан, содержащийся в виде примеси в препаратах соматических антигенов. Большую ценность, чем титрование антител, имеет определение в сыворотке циркулирующих антигенов гриба, особенно цитоплазматических. Определение антигенов осложняется формированием в сыворотке иммунных комплексов. Полисахаридные антигены высвобождаются из этих комплексов кипячением, для белковых антигенов методы выделения не разработаны. При диссеминированном кандидозе маннан выявляют у 50-70% больных при его отсутствии у здоровых лиц, что придает находке диагностическую значимость. Методом газо-жидкостной хроматографии в сыворотке определяют метаболиты гриба — маннозу и арабинитол. Определение сывороточного содержания арабинитола основывается на способности некоторых видов (C. albicans, C. tropicalis, C. pseudotropicalis, C. parapsilosis) синтезировать это вещество. При почечной недостаточности рекомендуется одновременное определение концентрации арабинитола и креатинина, так как скорость выделения этих веществ одинакова.

Диагностика системного кандидоза. Своевременный диагноз системного кандидоза представляет значительные трудности, поскольку клиническая симптоматика неспецифична. В диагностике кандидоза основная роль принадлежит лабораторным методам исследования: микроскопическим, культуральным, газохроматофическим и молекулярным.

Выявление кандидемии считается наиболее значимым диагностическим маркером гематогенного кандидоза и служит абсолютным показанием к проведению противогрибковой терапии. Следует иметь в виду, что системный кандидоз может не сопровождаться кандидемией. Наиболее важным признаком диссеминированного кандидоза является грибковый эндофтальмит (экссудативные изменения желто-белого цвета сосудистой оболочки глаза). Поэтому офтальмологическое обследование считается весьма значимым в комплексе диагностики и мониторинга больных, имеющих факторы риска диссеминированной кандидозной инфекции. Однако кандидозный эндофтальмит не является начальным признаком генерализации грибковой инфекции, даже у больных с кандидемией поражение сетчатой оболочки выявляют лишь в 9-15% случаев. Другие проявления диссеминированного кандидоза (в частности, поражения кожи и артрит) отмечаются крайне редко у больных в ОИТ. После операций, не затрагивающих почки, мочевой пузырь, а также в тех случаях, когда не было длительной катетеризации мочевого пузыря, кандидурия с выделением большого числа КОЕ является весьма подозрительным симптомом гематогенного поражения почек. Серологические методы включают определение антител к Candida spp. с помощью различных методов: (1) агглютинации, (2) иммуноэлектрофореза и (3) иммунодилюции. К сожалению, интерпретация получаемых данных часто затруднительна, поскольку антитела обнаруживаются и у здоровых людей, и в случаях обычной колонизации. Более того, эти методы дают отрицательный результат при грибковой инфекции у больных с иммунодефицитными состояниями и в начальной стадии системного кандидоза. Большей информативностью обладают серологические методы определения антигенов Candida spp., однако они также обладают лишь умеренной чувствительностью в случаях системного кандидоза. Перспективным методом диагностики является хроматографическое определение метаболитов грибов — D-арабинитола в различных биологических жидкостях и тканях инфицированных больных. Большинство патогенных Candida spp. (кроме С. crusei и C. glabrata) продуцируют значительное количество D-изомера арабинитола, и в сыворотке больных при инвазивном кандидозе определяется его повышенное содержание, а также повышение отношения D-арабинитол/креатинин. В проспективных клинических исследованиях подтверждена значимость серийных определений D-арабинитола для диагностики кандидоза у онкологических больных с нейтропенией. Однако инвазивный кандидоз во многих случаях протекает без кандидемии, что не может не отражаться на содержании D-арабинитола в крови и снижает диагностическую ценность метода. Весьма информативным является метод молекулярной лабораторной диагностики — полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяющая определить специфические области ДНК C. albicans, а также других грибов, в частности Аspergillus spp. Чувствительность ПЦР достигает 100%, а специфичность — 98%. По данным H.

Einsele и соавт. (1997), положительная ПЦР позволяет в среднем на 4 дня раньше, чем при обычном обследовании, установить диагноз диссеминированного кандидоза или легочного аспергиллеза. Высокая чувствительность метода позволила K.Ikegami и соавт.

(1999) определить наличие ДНК грибов в крови у более 50% больных в критическом состоянии, у которых не было фунгемии, а у многих также и признаков системной воспалительной реакции. Однако, по мнению M.

Ruhnke (1999), подтверждение диагностической роли молекулярных методов исследования нуждается в дальнейших доказательных клинических исследованиях.

Источник: https://doctorspb.ru/articles.php?article_id=1543

Диагностика кандидоза всех органов, проведение тестовых анализов

  14.04.2017

Кандидоз – это болезнь, при которой тело и слизистые покровы поражаются грибковой инфекцией рода Кандида.

Эти микроорганизмы считаются условно-патогенными, говоря другими словами, они присутствуют в организме каждого человека в малых количествах. Однако, если наблюдается сбой, то они начинают активно размножаться и приносят много дискомфорта.

Причины кандидоза

 Кандидоз способен проявиться в результате ряда факторов, к примеру, заболевания, переохлаждения, стрессовых ситуаций, перемен в гормональном фоне (во время приема гормональных препаратов или беременности).

Во время приема антибактериальных препаратов, вместе с патогенными бактериями гибнет полезная микрофлора влагалища и кишечника, которая отвечает за контроль развития и роста грибов Кандиды.

Часто грибок начинает проявляться в результате резкого снижения иммунитета, что возникает при инфекциях, венерических болезнях и ВИЧ.

Молочница может возникнуть при наличии у женщины заболеваний эндокринной системы (нарушений в работе щитовидной железы, ожирении, диабете).

Весь список причин возникновения кандидоза далеко не полный, заболевание может проявиться в результате таких факторов, как ношение синтетического, тесного и неудобного белья, а также при жарком климате.

Симптомы молочницы

В зависимости от очага расположения молочницы проявление заболевания может быть разным. Чтобы распознать болезнь и начать своевременное лечение рекомендуется знать первые симптомы проявления. В любом случае не стоит заниматься самостоятельной диагностикой и лечением, это может быть чревато серьезными бедствиями.

Кандидоз слизистой ротовой полости (детская молочница, оральный кандидоз) в большинстве случаев наблюдается у детей. Им заражается ребенок от матери во время родов, проходя через родовые пути, пораженные инфекцией. Слизистая десен, языка, зева, щек становится красного цвета, на ней образуются отеки.

Далее заболевание прогрессирует, определить кандидоз уже можно по наличию творожистого белого налета в местах поражения. В дальнейшем наблюдается увеличение их количества, появляется пленка.

Если специально убрать этот налет, то под ним находится эрозия. Если у человека была диагностирована хроническая форма кандидоза, то при ней может наблюдаться поражение слизистой оболочки пищевода, глотки, губ и носа.

Во время беременности кандидоз наблюдается примерно в 2-3 раза чаще, в результате ослабленного иммунитета и повышенного уровня половых гормонов.

На самом деле обнаруживать заболевание достаточно просто, так как оно отличается характерными для молочницы симптомами:

• во время занятий сексом наблюдается ощущение дискомфорта;
• неприятный запах, жжение и боль при мочеиспускании;
• творожистые белые выделения;
• зуд и жжение могут усиливаться к вечеру, до или после месячных, при несвоевременной гигиене;
• отек и покраснение слизистых оболочек половых органов.

У мужчин может проявляться молочница, диагностика кандидоза или внешние симптомы позволяют определить наличие заболевания. Если говорить про основные проявления, то к ним относят:

• боль во время полового акта;
• боль при мочеиспускании;
• на головке полового члена наличие белого налета;
• отек головки члена и крайней плоти;
• болезненность, зуд и покраснение в области головки полового члена.

Молочница кишечника (дисбактериоз) возникает на фоне вагинального кандидоза, но в некоторых случаях может развиваться изолированно. Такой диагноз ставится после перенесения кишечных инфекций или длительного приема антибактериальных препаратов. В данном случае грибок рода Кандида располагается в тонком кишечнике.

Лабораторные способы диагностики

Диагностика молочницы  должна начинаться с опроса пациента, а руководствуясь полученной информацией, могут возникнуть подозрения на наличие кандидоза. Лабораторная диагностика кандидоза заключается в микроскопическом соскобе.

В данном случае необходимо взять из пораженных участков для анализа материал, который будет исследоваться под микроскопом. Сразу можно разглядеть многие виды грибов. Но даже это не является гарантией наличия кандидоза, ведь грибы присутствуют в организме каждого человека, поэтому назначаются дополнительные анализы.

Далее будет культуральное обследование. Такая методика диагностики заключается в выращивании грибковой инфекции в среде, которая благоприятна для них. С пораженных участков берется материал и помещается в определенную емкость. С помощью такого метода удается определить активность микроорганизмов.

В том случае, если число патогенных грибов составляет 10000 КОЕ/мл, то скорей всего у больного молочница. В некоторых случаях для посева может применяться ликвора, смывы и кровь.

Тест-системы применяются, когда необходимо выявлять устойчивость грибковой инфекции к антибиотикам. С помощью такого исследования специалист сможет назначит эффективное средство, позволяющее быстро устранить молочницу. Рекомендуется проводить серологическую диагностику, исследование заключается в таких реакциях, как:

• реакция связывания комплемента (РСК);
• реакция преципитации (РП);
• реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);
• реакция агглютинации (РА).

Диагностика молочницы РА включает в себя проведение анализа на определение взаимодействия антител с  клетками грибка. После проведения исследования можно определить тяжелые частицы, которые оказываются в осадке. Именно это свидетельствует о поражении организма грибковой инфекцией.

Такая методика отличается своей простотой, поэтому в микробиологии пользуется большой популярностью. Обнаружить в организме антитела позволяет методика РПГА.

Если их число будет маленьким, сразу рекомендуется начинать соответствующее лечение. Применяется во время выявления разных грибковых и инфекционных болезней. С помощью анализа РП можно определить даже незначительное превышение уровня патогенных микроорганизмов, определить их устойчивость к разным средам.

Выявить молочницу желудка возможно при помощи проведения фиброэзофагогастродуоденоскопии (ФЭГДС). Такая методика дает возможность определить состояние желудка и пищевода, а также слизистую оболочку. Для обследования рекомендуется применять гастроскоп – тоннельную трубку с камерой на конце.

Проводить данную процедуру рекомендуется исключительно в соответствии со строгими предписаниями, соблюдая правила анализов.

Анализ на молочницу для выявления кандидоза в кишечнике осуществляется с помощью метода посева испражнений. В кал необходимо ввести большое количество грибка кандиды, при этом число полезных бактерий является малым. У человека может быть расстройство стула разного характера, иногда больному рекомендуется сдавать анализы крови и мочи.

Определение молочницы у женщин

Диагностика кандидоза осуществляется при помощи взятия соскоба с влагалища. Проводить процедуру рекомендуется на каждом гинекологическом осмотре. Мазок, который брался из полости шейки матки должен быть осмотрен при помощи микроскопа.

Такая методика не является информационной, а лишь указывает на наличие грибковой инфекции. Говоря о том, как выявить разновидность имеющегося грибка, рекомендуется провести исследование бактериального посева на наличие питательной среды. С помощью такой методики можно подтвердить либо опровергнуть присутствие в мазке заболеваний, передающихся половым путем или инфекций мочеполовой системы.

Если есть подозрение на кандидоз, диагностика может проводиться путем колькоскопии. Она проводится путем осмотра слизистой и полости влагалища при помощи кольпоскопа. В данном случае наличие молочницы диагностируется быстро. В шейку матки и полость влагалища вводится специальный раствор.

Если на его фоне наблюдаются вкрапления белого цвета ⏤ у женщины имеется молочница. При наличии болезней, передающихся половым путем, такой фактор нельзя назвать характерным.

Часто приходится делать развернутый анализ крови, для определения причин сниженного иммунитета. Проследить уровень глюкозы в крови можно для определения диабета, который становится причиной проблем с иммунной системой.

Определить наличие в организме ВИЧ позволит проведение такого анализа, как ПЦР. Главной особенностью инфекции становится блокирование защитной реакции организма. Цепную полимерную реакцию проводят с целью выявления вульвовагинального кандидоза.

Определение молочницы у мужчин

Многих мужчин интересует, какие анализы сдают при молочнице в их случае? В первую очередь нужно пройти осмотр врачом, так как кандидоз поражает крайнюю плоть и головку полового члена.

Врачу будет достаточно только одного взгляда, чтобы понять наличие той или иной болезни. А вот определить насколько серьезная болезнь по одному только взгляду не получится.

В этом случае потребуется взять анализы.

Единичного забора хватит для того, чтобы не только определить у мужчины наличие молочницы, но и различные урогенитальные болезни, которые при незащищенном занятии сексом могут передаваться половым путем.

Вывод

Теперь, зная, как диагностировать кандидоз, вы сможете вовремя определить наличие заболевания и начать его своевременное лечение. Справиться с болезнью на начальной стадии проще, в среднем курс лечения не занимает более 7 дней.

Ни в коем случае не стоит пренебрегать своим здоровьем или начинать самостоятельное лечение, ведь в таком случае вы можете нанести серьезный вред своему организму.

Источник: https://gribok24.ru/molochnitsa/diagnostika-kandidoza.html